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普通微生物学实验

Lab of Microbiology

理论课程编号：03610505j

适用专业：应用生物科学

实验学时：16

总学分：0.5学分

开出实验个数：综合及设计性实验4个

2、实验课程简介

普通微生物学实验课是重要的专业基础课，通过本课程的学习使员工掌握相关的理论知识，并在实验棵中达到理论与实践的结合。通过对微生物形态的观察、培养基的制备、微生物无菌操作技能的掌握以及微生物的培养等实验内容，使员工加深对微生物的感性认识，并掌握微生物学实验室操作的基本技巧和无菌操作的基本概念。

3、实验教学目标及基本要求

在本门课程的学习中我们将使员工基本掌握微生物实验室操作规程、常用仪器的使用方法与原理，并具有初步解决相应问题的能力。培养和锻炼员工在微生物学领域的基本实验技能，为进行下一步生物技术及微生物专业课学习奠定良好实验技能基础。培养员工的观察能力、动手能力、实践操作能力和辩证思维能力，为今后从事教学、科研和生产工作打下扎实基础。

基本要求是将侧重培养员工的显微镜使用能力、制片能力和无菌操作能力和意识；培养员工严谨的科学态度，良好的实验素质，分析问题和解决问题的独立工作能力，通过实验获得的感性认识，从而能更深入理解微生物学基本概念和原理。

4、教材及主要参考书

《微生物学实验》       沈萍等   主编  高等教育出版社  2009

《微生物学实验手册》   周德庆   主编  上海科技出版社  2012

《微生物学实验》       钱存柔   主编  北京大学出版社  2013

《微生物学实验》       赵斌     主编 北京科学出版社  2014

 

实验一 显微镜油浸物镜的使用及细菌的染色与形态的观察

1、实验特点：

类型：验证      类别：专业基础     计划学时：4学时   每组人数：3人

2、实验目的与要求：了解显微镜原理，掌握油镜的使用方法，掌握简单染色和革兰氏染色方法。

3、主要仪器设备：

4、实验内容提要：利用油镜观察细菌染色标本片子，并且同时绘图。单染色和革兰氏染色的过程。

5、实验操作要点：油镜浸入到油中后，要慢慢提升镜头，同时在目镜中观察。要严格控制各步染色的时间。

6 、注意事项：光线要亮度大、均匀；油不要加的太多；换片子时要提升镜头，以免擦伤镜头；使用完毕要注意保养镜头，并使显微镜还原成最初稳定状态。滴水要少，取菌要少，涂菌面积要大、涂菌要均匀；酒精脱色是革兰氏染色的关键步骤。

7、试验材料：Rhodococcuserythropolis（红平红球菌）；Pseudomonas sp.（假单胞菌）。

8、试验步骤：

9、思考与讨论：

实验二 培养基配制及灭菌

1、实验特点：

类型：验证      类别：专业基础     计划学时：4学时   每组人数：3人

2、实验目的与要求：掌握培养基的制备过程。

3、主要仪器设备：

4、实验内容提要：称样---溶解---调pH---定容---分装---灭菌。

5、实验操作要点：不同培养基的成分要求、配置过程及灭菌要求；棉塞制作；吸头盒等不同类型用具灭菌方法。

6、注意事项： 注意药品称量顺序，微量药品的配置方法；培养基配制及药品称量，避免药品残留相互带入杂志；溶解样品时琼脂要早加入、勤搅动；灭菌时，要按照操作规程进行，高压灭菌器使用时注意安全；糖类不能再121℃30min；塑料都不可灭菌；各种瓶塞和试管塞不可拧太紧，保证透气性，否则会致使膨胀。

细菌、放线菌和丝状真菌的培养基，操作动作要干净利落、试管管口要灭菌、试管不能迎风移动。

7、试验材料：细菌、放线菌和丝状真菌的培养基

牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏 3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，H₂O1000mL，pH7.0。

高氏1号合成培养基：淀粉 20g，FeSO₄.7H₂O 0.01g，NaCl 0.5g， MgSO₄.7H₂O 0.5g，K₂HPO₄.3H₂O 0.5g， KNO₃ 1g， H₂O 1000mL，pH7.0。

重铬酸钾溶液（300mL培养基加3%的重铬酸钾1mL）--高氏1号培养基在临用时在已融化的培养基上加重铬酸钾溶液(重铬酸钾为一类致癌物)，可抑制细菌和霉菌的生长。

PDA合成培养基：PDA粉37g，H₂O 1000mL，pH6.0。

玫瑰红(0.0133g/L PDA培养基，即13.3g/L,100 μL至100mL培养液中）：玫瑰红不能高温蒸汽灭菌，玫瑰红钠作为选择性抑菌剂可抑制细菌的生长，并可减缓某些霉菌因生长过快而导致菌落漫延生长。

8、试验步骤： 培养基配置完成后立刻高温高压灭菌：1.05kg/cm², 121℃, 20 min。

9、思考与讨论：

实验三  微生物无菌操作技术及土壤微生物筛选与培养

1、实验特点：

类型：综合设计性      类别：专业基础     计划学时：4学时   每组人数：3人

2、实验目的与要求：掌握无菌操作技术、不用类型微生物的分离与培养方法。

3、主要仪器设备：

4、实验内容提要：制固体平板--称样--稀释涂布、点样法接种---恒温培养。

5、实验操作要点：无菌操作技术。

6、注意事项：

7、试验材料：土壤样品

8、试验步骤：稀释平板法，点样法

9、思考与讨论：

实验四 微生物的纯系分离及接种技术

1、实验特点：

类型：验证      类别：专业基础     计划学时：4学时   每组人数：3人

2、实验目的与要求：掌握细菌、放线菌和霉菌稀释分离、划线分离等技术；学习从样品中分离、纯化出所需菌株。

3、主要仪器设备：

4.  实验内容提要：

a细菌单菌落,用接种丝接种--倒置培养

b真菌用接种勾接种--正置培养

c放线菌用灭菌牙签沾无菌水接种----倒置培养

5、实验操作要点：细菌、放线菌、丝状真菌稀释分离、划线分离等技术。

6、注意事项： 培养细菌、放线菌、丝状真菌微生物的培养条件和培养时间。

7、试验材料：综合实验分离出的各类菌体。

8、试验步骤：稀释平板法，点样法

9、思考与讨论：